Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados

Abstract

Uma lectina da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (SejaBL) foi isolada por combinação de precipitação acetônica, fracionamento salino, cromatografia de troca iônica e gel filtração. A massa molecular de SejaBL foi determinada por SDS-PAGE e gel filtração, sendo de 52,0 kDa e 50,0 kDa, respectivamente. A lectina é uma glicoproteína com teor de carboidrato neutro de 6,94%, composta por duas subunidades com mesma massa molecular de 24 kDa. A lectina purificada hemaglutinou hemácias de coelho e humana. Glicoproteínas inibiram a hemaglutinação. SejaBL apresentou atividade máxima na faixa de pH 3,0-7,5, estabilidade térmica até 70 °C e é potencial inibidor da atividade da tripsina. Espectroscopia de fluorescência indicou a existência de superfícies hidrofóbicas. Lectina inibiu o crescimento micelial de Fusarium moniliforme e Fusarium oxysporum com um IC50 de 123±0,5&#956;g e 303±0,9&#956;g, respectivamente. Organismos não alvos, larvas Artemia salina e embriões de Biomphalaria glabrata, não foram afetados, indicando baixa toxicidade ambiental. Como modelo experimental, a lectina purificada de S. jacobinensis (SejaBL) foi utilizada como prova de que mudanças no centro hidrofóbico, causados pela irradiação gama, alteram estruturalmente proteínas. Para elucidar o efeito dos radicais livres nas propriedades moleculares de SejaBL atividade, estrutura terciária (intrínseca e bis-ANS fluorescência), massa molecular e perfil cromatográfico foram examinados após - irradiação em várias doses (0,020 a 35kGy). Atividade hemaglutinante específica (AHE), na lectina irradiada, mostrou perda significativa (p<0,05) acima de 12,5kGy e aumento significativo (p<0,05) em 0,1, 0,8 e 1kGy. Espectroscopia de fluorescência indicou supressão da emissão de fluorescência quando excitado a 280 e 295nm, com elevada ligação do bis-ANS, após altas doses. SDS-PAGE e HPLC-RP mostraram fragmentação polipeptídica. Mudança significativa na superfície hidrofóbica indicou captação de hidrogênio radical em aminoácidos, causando desorganização estrutural da lectina. Flavonóides são produtos secundários de plantas com capacidade para capturar radicais livres. A lectina da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBL), proteína capaz de ligar a carboidrato, tem sua superfície hidrofóbica modificada por radicais livres produzidos pela água radiólise. No presente estudo, o efeito protetor sobre a proteína pela estabilidade antioxidante de flavonóides da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBF), após irradiação gama, foi investigada. Dois flavonóides foram isolados com rápida recuperação da capacidade para capturar radical mensurado pelo 2,2-difenil-1-picrilhidracilo radical (DPPH) a 0,5 mg/mL, após alta dose de irradiação. Os danos causados por irradiação na AH foi minimizado em 55% na presença dos flavonóides. Os resultados mostraram radioestabilidade da capacidade antioxidante de SejaBF, protegendo a lectina de radicais livres após irradiação