Caracterização do complexo de iniciação da tradução eIF3 e investigação de sua associação a complexos do tipo eIF4F em Leishmania infantum

Abstract

A iniciação da síntese protéica em eucariotos depende da ação dos chamados fatores de iniciação da tradução ou eIFs. Dentre esses, destacam-se dois complexos: eIF4F, formado pelos eIF4A, eIF4E e eIF4G; e eIF3, que em mamíferos compreende 13 subunidades (eIF3a até eIF3m). Suas ações permitem o reconhecimento dos mRNAs, via eIF4E, e o recrutamento do ribosomo, mediado pelo eIF3 que por sua vez interage com o eIF4F. Em espécies de Leishmania seis homólogos de eIF4E foram identificados (EIF4E1 a 6) que parecem divergir funcionalmente enquanto o complexo eIF3 ainda é pouco caracterizado. Este trabalho buscou avaliar a presença, composição e função do eIF3 em Leishmania. Um total de 11 subunidades do complexo foram confirmadas a partir de ensaios de imunoprecipitação (IP) e espectrometria de massa utilizando soro direcionado a subunidade EIF3E. Visando uma melhor caracterização, seis dessas subunidades tiveram seus genes clonados e foram expressas em L. infantum, fusionadas ao peptídeo HA. Quatro destas proteínas heterólogas foram utilizados em novas IPs, com soro anti-HA, onde se avaliou sua capacidade de copurificar com o EIF3E. Todas mostraram essa interação, confirmando sua presença em complexos eIF3 íntegros. Homólogos de eIF4E de L. infantum também foram expressos fusionados a HA e utilizados em IPs semelhantes. Dois destes, EIF4E2 e EIF4E3, mostraram uma associação, direta ou indireta, com a subunidade EIF3E do complexo eIF3, indicando um papel relevante na tradução.