Efeito do benzonidazol sobre as células mononucleares submetidas à infecção in vitro com uma cepa de trypanosoma cruzi resistente ao tratamento

Abstract

O fármaco preconizado para o tratamento da doença no Brasil é o benzonidazol (Bz) e atualmente sua utilização na fase crônica da doença de Chagas tem por finalidade prevenir ou retardar a evolução da doença para formas clínicas mais graves. Acreditamos que o sucesso do tratamento dependa do sinergismo entre a ação tripanocida do Bz e a resposta imune do hospedeiro, Nosso estudo avaliou as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) infectadas in vitro com uma cepa de Trypanosoma cruzi que tem resistência ao Bz, a cepa colombiana (CCol), e adição do tratamento com Bz. O sangue de indivíduos voluntários não portadores da doença (n=11) foi coletado em sistema à vácuo em tubos contendo heparina sódica. As células mononucleares foram separadas através de centrifugação em gradiente de densidade por Ficoll Hypaque PLUSᵀᴹ. As PBMCs foram depositadas em placas de 48 poços (1 x 10⁶ células/mL) para adesão das células aderentes/ monócitos por 1h. Em seguida, as células não aderentes (linfócitos) foram removidas e reservadas. e os tripomastigotas da CCol foram adicionados (2,5 x 10⁵ parasitas/ poço) durante 2h. Os parasitas que não se interiorizaram foram removidos por lavagem e por fim,os linfócitos foram readicionados e o tratamento com Bz foi adicionado. Os co-cultivos foram incubados por 24h, 5 e 10 dias. Os sobrenadantes de cultura foram estocados a -20°C para a dosagem de citocinas (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e TNF) por cytometric beads array (CBA), e com as células do co-cultivo, foi realizada a imunofenotipagem para as moléculas CD28⁺ e CTLA-4⁺ em linfócitos CD4⁺ e CD8⁺, e CD80⁺, CD86⁺ e HLA-DR⁺ em monócitos CD14⁺. Nossos resultados demonstraram que o Bz induziu uma modulação negativa da ativação celular em células T CD4⁺ e CD8⁺ por aumentar a expressão de CTLA-4 e por promover a diminuição de HLA-DR em monócitos, além de reduzir a produção de IL-2 e IFN-γ em PBMC infectadas in vitro com a CCol, quando comparadas ás células sem tratamento. Portanto, por induzir essa inibição da resposta celular acreditamos que a utilização de Bz poderia trazer benefício ao indivíduo infectado por cepas de T. cruzi resistentes ao Bz, se os esquemas de tratamento pudessem ser personalizados de acordo com o tipo de cepa albergada pelo indivíduo.