Caracterização preliminar de homólogos de fatores de iniciação da tradução eIF4B e eIF5 e de possíveis parceiros da proteína de ligação ao poli-A (PABP) em Leishmania infantum

Abstract

Nos eucariotos, o reconhecimento dos mRNAs pelo ribossomo durante a iniciação da tradução depende da ação do complexo heterotrimérico eIF4F (eukaryotic Initiation Factor – Fator de Iniciação Eucariótico - eIF), bem como da proteína de ligação ao poli A (PABP). Juntos eles promovem a circularização do mRNA e estimulam sua tradução, mas sua ação depende de outros fatores, como os eIF5 e eIF4B. Múltiplos homólogos de subunidades do eIF4F e da PABP, cuja caracterização está em andamento, foram identificados nos tripanossomatídeos, protozoários patogênicos. Esta caracterização depende de um melhor conhecimento sobre parceiros funcionais, como homólogos de eIF5 e eIF4B, e sobre proteínas hipotéticas identificadas como parceiras da PABP, como as LinJ.33.0390 e ZC3H41. Este trabalho teve como objetivo caracterizar estas quatro proteínas a partir da sua expressão em L. infantum fusionadas ao epítopo HA. Esta expressão foi confirmada e avaliada e teve como destaque a confirmação de múltiplas isoformas para o homólogo de eIF4B, sugerindo fosforilação. Ensaios de imunoprecipitação foram realizados utilizando soro anti-HA seguido da investigação de proteínas associadas. Para o homólogo de eIF4B não foram identificados fatores de tradução entre seus parceiros, o que sugere que ele possa desempenhar outra função. Foi confirmada a associação do eIF5 com parceiros conhecidos, como o complexo eIF2, concluindo a sua identificação. Homólogos de subunidades do eIF4F, contudo, foram identificados entre os parceiros da LinJ.33.0390. Já a associação da ZC3H41 com os três homólogos de PABP foi confirmada. Estes resultados agregam informações relevantes sobre o processo de tradução em tripanossomatídeos, etapa esta ainda não bem elucidada.