Avaliação das atividades biológicas e imunomoduladora de crataBL encapsulada em lipossomas

Abstract

O objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar a citotoxicidade, atividade tripanocida, antibacteriana, antibiofilme e imunomoduladora da CrataBL encapsulada em lipossomas. Os lipossomas contendo CrataBL (CrataBL-Lipo) foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico seguido de ciclos de congelamento e descongelamento e sonicação. Eles foram caracterizados quanto ao tamanho de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, pH e taxa de encapsulação. A citotoxicidade de CrataBL e CrataBL-Lipo foi avaliada em linhagens celulares de fibroblastos L929 e macrófagos J774A.1 e os resultados foram expressos na concentração capaz de inibir 50% da viabilidade celular (CC₅₀). A atividade tripanocida de CrataBL e CrataBL-Lipo foi determinada utilizando tripomastigotas obtidos a partir de cultura celular infectada e os resultados foram expressos na concentração capaz de inibir 50% da viabilidade celular do parasito (IC₅₀). O mecanismo de indução da morte dos tripomastigotas após o tratamento com CrataBL-Lipo foi avaliado utilizando a técnica de citometria de fluxo. A atividade imunomoduladora de CrataBL-Lipo foi avaliada em macrófagos J774A.1 e as citocinas foram quantificadas utilizando o kit de mouse CBA Th1/Th2/Th17. A atividade antibacteriana de CrataBL e CrataBL-Lipo frente a Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA), Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) e Staphylococcus aureus resistente à vancomicina (VRSA) foi determinada através do método de microdiluição em caldo de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para estabelecer a concentração inibitória mínima (CIM). A atividade antibiofilme de CrataBL e CrataBL-Lipo foi avaliada utilizando o método de coloração por cristal violeta em concentrações subinibitórias (CIM/2 e CIM/4). Os lipossomas contendo CrataBL apresentaram tamanho de partícula de 101,9 ± 1,3 nm, índice de polidispersão de 0,245, potencial zeta de +33,8 ± 1,3 mV, pH 7,41 e eficiência de encapsulação de 80 ± 0,84%. A CrataBL apresentou citotoxicidade apenas para fibroblastos L929 (CC₅₀ = 56,8 μg/ml), enquanto que CrataBL-Lipo não exibiu citotoxicidade nas linhas celulares de macrófagos J774A.1 e de fibroblastos L929 (CC₅₀ > 100 μg/ml). CrataBL não exibiu atividade tripanocida, porém CrataBLLipo apresentou IC₅₀ de 1,1 μg/ml com índice de seletividade maior que 90,9. CrataBL-Lipo induziu a morte celular do parasito através da apoptose tardia e necrose. CrataBL-Lipo apresentou atividade imunomoduladora com redução da 10 síntese de IL-10 e TNF-α. CrataBL não exibiu atividade antibacteriana (CIM > 0,72 mg/ml), porém CrataBL-Lipo apresentou CIM variando de 0,56 a 0,72 mg/ml frente a MSSA, MRSA e VRSA. CrataBL apresentou atividade antibiofilme em concentrações subinibitórias inibindo de 38,8% a 55,4% a formação de biofilme e reduzindo de 2,5% a 19,8% o biofilme préformado de MSSA, MRSA e VRSA, enquanto que CrataBL-Lipo apresentou maiores porcentagens de inibição da formação do biofilme (45,4% a 75,6%) e redução do biofilme préformado (12,1% a 69,2%). Os resultados obtidos neste estudo sugerem que CrataBL encapsulada em lipossomas é promissora para infecções causadas por Trypanosoma cruzi, MSSA, MRSA e VRSA, bem como apresenta potencial imunomodulador.