Análise genética dos determinantes de resistência à colistina em isolado clínico de Citrobacter freundii

Abstract

O Citrobacter freundii está frequentemente envolvido em infecções nosocomiais e tornando-se cada vez mais resistentes as múltiplas drogas, principalmente aos carbapenêmicos. Diante desse quadro, as polimixinas têm sido usadas, como última opção terapêutica. Contudo, o aumento e o inapropriado uso das polimixinas têm provocado a emergência mundial de bactérias resistentes a este fármaco. Neste trabalho visoudeterminar os fatores envolvidos no desenvolvimento da resistência à colistina no isolado clínico Citrobacter freundii C156, através da análise da estrutura molecular e identificação de possíveis mutações, deleções e/ou inserções nos determinantes genéticos e da associação desses eventos genéticos na resistência á colistina apresentada pela cepa C. freundii C156. O C. freundii C156 foi isolado de paciente de 76 anos do sexo masculino internado em um hospital de referência do Recife-PE. Os determanantes de resistência às polimixinas do C. freundii C156 foram determinados através de sequenciamento de alto rendimento e, em seguida, comparados com sequências relacionadas para enterobactérias, através das ferramentas BLAST e suas variantes. Foram feitas análises funcionais através das ferramentas PROVEAN, para predição do comprometimento da função proteica, e PSORT, SMART E TrSSP para inferência de localização celular, domínio e função transportadora e substrato específico, respectivamente. Por fim, foram analisados o perfil plasmidial e os genes adquiridos de resistência para determinação do resistoma do isolado e suas implicâncias clínicas, através das ferramentas PlasmidFinder e ResFinder. Foi encontrada a única mutação no domínio HAMP do sensor CrrB, A91T na sequência de aminoácidos. A análise do resistoma apresentou genes bem conservados para resistência a aminoglicosídeos, quinolonas e β-lactâmicos compatível com relatos da literatura. A análise plasmidial apresentou plasmídeos com IncHI2 e IncHI2A e ColRNAI cita na literatura com carreadores de genes de resistência compatível com os encontrados na análise dos determinantes de resistência a antimicrobianos. Foi identificado um novo perfil alélico (sequence type - ST) para C. freundii C156, ST117, o que confirma a diversidade genética relatada em pesquisas anteriores. Nenhum determinante de resistência a colistina apresentaram alterações significativas nas suas sequências de aminoácidos. Logo se conclui que a resistência a colistina encontrada em C. freundii C156 pode estar relacionada à mutação detectada no domínio HAMP do sensor CrrB.