Investigação do efeito imunomodulador do inibidor de tripsina de flores de Moringa oleifera sobre células infectadas com Trypanosoma cruzi

Abstract

A doença de Chagas, conhecida como tripanossomíase americana, é uma enfermidade endêmica e letal causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Moringa oleifera é uma planta Pantropical cujas fores expressam um inibidor de tripsina proteico (MoFTI, do inglês M. oleífera flower trypsin inhibitor) que foi previamente relatado como agente tripanocida. Este trabalho avaliou o efeito de MoFTI sobre a viabilidade de células mononucleares de sangue periférico humanas (PBMCs), bem como seu efeito sobre a produção das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF e óxido nítrico (NO) por PBMCs infectados com T. cruzi. Flores frescas foram homogeneizadas com água destilada para obtenção do extrato e MoFTI foi isolado por cromatografia de afinidade em coluna contendo Tripsina-Agarose. Em seguida, o inibidor foi avaliado quanto ao efeito na atividade de tripsina utilizando o substrato comercial BApNA e na sobrevivência de tripomastigotas de T. cruzi livres. MoFTI foi avaliado quanto ao efeito na viabilidade de PBMCs e foram determinadas concentrações seguras para avaliação do efeito imunomodulador. Índices de seletividade foram calculados como a razão entre os valores de CC50 e CL50 (concentração 50% citotóxica, e concentração que mata 50% dos tripomastigotas de T. cruzi, respectivamente). Após isso, o efeito de MoFTI sobre a produção de citocinas e óxido nítrico (NO) por PBMCs infectados com T. cruzi foi investigado. MoFTI (62 U/mg de atividade inibidora contra tripsina) foi hábil em matar tripomastigotas livres (LC50 de 43,55 μg/mL) corroborando com os resultados que já foram descritos e não apresentou toxicidade para PBMCs até 500 μg/mL. O inibidor foi fortemente seletivo para tripomastigotas em relação aos PBMCs (índice de seletividade maior que 11,48). Quando os PBMCs foram infectados com T. cruzi e tratados com MoFTI (43,55 ou 87,1 μg/mL) a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e INF-γ) e anti-inflamatória (IL-10), bem como de NO foi significativamente (p < 0.05) aumentada. Em conclusão, os dados relatados neste trabalho apontam MoFTI como um promissor agente imunomodulador sobre PBMCs humanos infectados com tripomastigotas de T. cruzi com um bom grau de especificidade para as células do parasita em relação às células sanguíneas hospedeiras.