Purificação, caracterização e avaliação do potencial antimicrobiano da lectina da folha de Guazuma ulmifolia LAM

Abstract

Lectinas são proteínas (hemaglutininas) multivalentes encontradas de forma ubíqua na natureza, as quais podem apresentar atividade catalítica, reconhecimento de modo específico de carboidratos na superfície de microrganismos, bem como atividade citoprotetora frente antígenos e/ou patógenos. O objetivo deste trabalho foi isolar, purificar e caracterizar uma lectina presente na folha de Guazuma ulmifolia LAM (GuaZuL) e avaliar sua atividade antibacteriana. As folhas foram lavadas, secas, trituradas até a forma de pó. O extrato bruto (EB) foi obtido por agitação do pó das folhas (10%, p/v) durante 4 h em solução de NaCl 0,15 M, seguido de centrifugação. Em seguida, o EB foi submetido ao fracionamento salino com sulfato de amônio, onde a fração 0-40% apresentou maior atividade hemaglutinante (AH), sendo esta, submetida à cromatografia por troca iônica (aniônica) em DEAE-Sephadex. A amostra foi dialisada e liofilizada e submetida a SDS-PAGE, e a banda proteica visualizada foi denominada de GuazuL Após esse procedimento a proteína foi caracterizada através de análises físico-químicas (temperatura, pH e íons). A detecção da lectina foi realizada através de testes de atividade hemaglutinante (AH) utilizando eritrócitos humanos (ABO) e sangue de coelho, pelo método de diluição seriada. Os ensaios antibacterianos foram realizados por meio do método de microdiluição em caldo para obtenção da concentração inibitória mínima (CIM) frente a diferentes cepas bacterianas ATCCs. GuaZuL é uma glicoproteína de aproximadamente 35 kDa que aglutinou eritrócitos de coelho e humanos com maior especificidade para tipo sanguíneo B e foi inibida pelas glicoproteínas Azoalbumina, azocaseína e caseína. A lectina foi termoestável até 100°C, com maior estabilidade em pH 5.0-8.0 e os íons não afetaram sua atividade. Na avaliação da atividade antibacteriana, GuaZuL apresentou atividade bacteriostática e bactericida (CIM: 15,62 μg mL-1; CBM: 15,62-62,5 μg mL-1), frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii. Em conclusão, a GuazuL é uma lectina obtida a partir das folhas de G. ulmifolia, termoestável, com amplo espectro de ação antibacteriana e com características relevantes que permitem a sua possível aplicação em diferentes processos biotecnológicos.