Avaliação do potencial imunomodulador ex vivo do IBPA na esclerose sistêmica

Abstract

A Esclerose sistêmica (ES) é uma doença do tecido conjuntivo, caracterizada pela fibrose da pele e de órgãos internos, alterações vasculares e presença de autoanticorpos. Poucas terapias eficazes existem até o momento para tratamento da ES, e a maior parte é direcionada para os sintomas. Dessa forma, o objetivo do trabalho é avaliar a atividade imunomoduladora ex vivo do híbrido IBPA (ibuprofeno + paracetamol) em células de pacientes com esclerose sistêmica. Foram incluídos no estudo 12 pacientes com ES atendidos no ambulatório de Esclerose Sistêmica do Serviço de Reumatologia, no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco. A cultura de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram isoladas a partir do sangue por centrifugação com Ficoll Paque TM Plus (GE HealthcareBio-Sciences). As células isoladas foram cultivadas em placas de 24 poços (10^6 células/1000 µL) em meio RPMI 1640, suplementado com 10% de Soro Bovino Fetal em estufa de CO2 5% a 37ºC. Após o plaqueamento 24 poços, foram estimuladas com anti-CD3 e anti-CD28 (Invitrogen eBioscience ™) e foram tratadas ou não com IBPA (50uM), Ibuprofeno (28,8uM), Paracetamol (21,2 uM) e Ibuprofeno com Paracetamol em mistura física (28,8uM e 21,2uM, respectivamente). Após 48 horas, as placas foram centrifugadas para coleta dos sobrenadantes que foram armazenados a -80ºC para posterior dosagem por ELISA das citocinas/quimiocinas IL-4, IL-6, IL-8 e CCL-2. Observamos que para IL-6 o grupo estimulado com anti-CD3/CD28 teve secreção aumentada da citocina quando comparado ao grupo que não recebeu estímulo (células) (**p=0,0098). Em seguida, avaliou-se o tratamento com o IBPA, que reduziu significativamente os níveis da IL-6 em comparação com as condições estimuladas com anti-CD3/CD28 (***p=0,005). Para CCL-2, o grupo estimulado não teve diferença estatisticamente significativa quando comparado ao grupo que recebeu apenas células. Já o tratamento com o híbrido IBPA reduziu significativamente os níveis da CCL-2 nas condições apenas estimuladas (***p=0,005). Para IL-8 o grupo estimulado com anti-CD3/CD28 foi significativamente maior quando comparado ao grupo que recebeu apenas células (***p=0,005). O tratamento com o híbrido IBPA reduziu significativamente os níveis da IL-8 em comparação com a condição estimulada com CD3/CD28 (**p=0,0093). Para a IL-4, o grupo estimulado com CD3/CD28 não teve diferença estatística quando comparado ao grupo que recebeu apenas células. O tratamento com o IBPA não alterou significativamente a secreção da IL-4 quando comparado com a condição de estímulo. Sendo assim, foi possível verificar que o tratamento com o híbrido IBPA em PBMC de pacientes com ES promoveu redução significativa nos níveis de IL-6, IL-8 e CCL2, evidenciando importante atividade imunomoduladora e sugerindo seu potencial terapêutico na doença. Não foram observados efeitos do tratamento do híbrido IBPA na secreção da citocina IL-4.