Isolamento de proteínas de folhas de Chamaesyce hirta e investigação de atividades biológicas

Abstract

Chamaesyce hirta é uma espécie herbácea pertencente à família Euphorbiaceae, com grande valor medicinal, sendo utilizada para o tratamento de doenças respiratórias, gastrointestinais, inflamatórias e bacterianas. Este trabalho descreve o isolamento da lectina de folhas de C. hirta (ChLL, do inglês C. hirta leaf lectin) através de extração de proteínas com tampão fosfato de sódio 0,1 M contendo NaCl 0,15 M, precipitação de proteínas utilizando sulfato de amônio 20-40% de saturação e cromatografia da fração precipitada (FP20-40%) em coluna de quitina. A atividade hemaglutinante (AH) foi monitorada ao longo do processo de purificação utilizando eritrócitos de coelho. O perfil eletroforético em condições desnaturantes e em condições nativas foi avaliado em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Efeitos de pH e temperatura na conformação também foram avaliados. A atividade antimicrobiana contra bactérias e fungos foi avaliada através da determinação da concentração mínima inibitória (CMI), mínima bactericida (CMB) e mínima fungicida (CMF). O extrato e FP20-40% apresentaram AH específica de 10,5 e 61,1, respectivamente. ChLL adsorveu na coluna de quitina e foi eluida com ácido acético 1,0 M com AH específica de 98,76. ChLL apresentou massa nativa de 90 kDa, sua AH foi detectada em valores de pH de 3,0 a 8,0, foi resistente ao aquecimento até 100°C durante 30 min e não foi estimulada pelos íons divalentes Mg2+, Mn2+ e Ca2+ a 10 mM. ChLL foi agente bacteriostático e bactericida contra Pectobacterium carotovorum carotovorum (CMI e CMB de 6,25 μg/mL), enquanto apenas inibiu o crescimento de Pectobacterium carotovorum brasiliensis e Pectobacterium sp. (CMI 6,25 e 25 μg/mL). ChLL mostrou atividade antifúngica contra espécies de Candida com CMI e CMF de 3,125 μg/mL. Em conclusão, ChLL é uma lectina ligadora de quitina, termoestável, ativa em ampla faixa de pH e com ação antibacteriana e antifúngica.