Obtenção de enzima colágenolítica, colágeno e hidrolisado proteico a partir de resíduos de robalo-flexa (Centropomus undecimalis)

Abstract

Os peixes têm se tornado um produto de grande valia para os consumidores em geral, isto, devido ao seu consumo e demanda na produção por ser um alimento saudável e bastante recomendado em dietas nutricionais, onde pode-se encontrar grandes fontes de proteínas, vitaminas e ômega3. Em consequência desse alto consumo, surge um aumento significante da quantidade de resíduos sólidos gerados pelas indústrias pesqueiras, que são descartados de maneira inadequada ao meio ambiente. O objetivo desse trabalho foi obter a enzima colagenolítica, colágeno e hidrolisado proteíco a partir de resíduos do robalo-flexa (Centropomus undecimalis). Utilizou-se vísceras intestinais para obtenção da enzima colagenolítica (extrato bruto) e com Sistema de Duas fases Aquosas (SDFA), obteve o extrato parcialmente purificado. No SDFA, foi elaborado um planejamento fatorial 24, foram analisados os efeitos das variáveis: massa molar do polietilenoglicol - PEG (400, 3350 e 8000), concentração de PEG (20, 22 e 24), concentração de citrato de sódio (15%, 20%, 22% e 25%) e pH (6, 7 e 8). Foi realizado o teste de inibidores com a enzima parcialmente purificada utilizando a Benzamidina (BEZN), Fenil-metil-sufonil fluoreto (PMSF), Tosil lisina clorometil cetona (TLCK) e Tosil fenilalanil clorimetil cetona (TPCK). A partir da pele foi obtido o colágeno ácido-solúvel (ASC) e colágeno pepsino-solúvel (PSC). Ambos os colágenos (ASC e PSC) foram caracterizados através da técnica eletroforese de SDS-PAGE e espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FT-IR). Foram obtidos hidrolisados proteícos a partir da ação da enzima colagenolítica do extrato bruto e parcialmente purificado utilizando os colágenos ASC e PSC. No processo de purificação por SDFA, a enzima teve predileção pela na fase PEG, apresentando fator de purificação e coeficiente de partição 3,91 e 14,78, respectivamente. A variável independente massa molar do PEG também apresentou efeito positivo no fator de purificação, enquanto que a concentração de polímero teve um efeito negativo para esta variável resposta. No teste de inibidores a enzima parcialmente purificada apresentou inibição de 74% na BENZ, 76% PMSF, 78% TLCKe 78% TPCK .O rendimento do colágeno ASC e PSC foram de 7,28% e 9,06%, respectivamente com base no peso seco. Na eletroforese, foi possível verificar o perfil dos colágenos com a presença de bandas (ASC e PSC) com variação de 200 kDa a 120kDa, sendo mais intensa no PSC. Na análise do colágeno através do FT-IR foram verificadas a presença de amida A, amida B e bandas de amida I, amida II e amida III. A hidrólise foi mais efetiva após 36 horas, apresentando pela eletroforese bandas mais intensas de massas molares de 70kDa e 32kDa. Diante desse estudo, foi possível agregar valor e verificar a importância do reaproveitamento dos subprodutos de peixes para a obtenção da enzima colagenolítica e colágeno, bem como a obtençãode hidrolisados proteícos que podem ser utilizados para a produção de ração, inclusive, para os próprios peixes e produção de peptídeos e sua potencialidade biológica.