Avaliação de estratégias vacinais profiláticas baseadas em plataforma de ácido nucleico e Yeast surface display utilizando a infecção pelo SARS-COV-2 como modelo

Abstract

O SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus - 2) é considerado um vírus emergente de importância mundial, sendo causador da doença do coronavírus 2019 (COVID-19). Assim, diferentes estratégias vacinais foram desenvolvidas e licenciadas para uso em humanos. Contudo, o surgimento de novas variantes e a possibilidade de novos surtos têm causado preocupação, destacando a impostância do desenvolvimento de novas estratégias vacinais. Por outro lado, estudos que abrangem plataformas vacinais de fácil edição e baixo custo combinando eficácia e segurança mostram-se alternativas promissoras, como as vacinas baseadas em antígenos sintéticos. Neste contexto, se propõe o uso de antígeno sintético desenvolvido como base para a construção de vacina de DNA, e também a construção de vacina baseada em levedura recombinante como forma alternativa de apresentação do multi-epítopo. A partir da síntese do antígeno sintético (Scov2-Sint1), composto por epítopos das proteínas Spike e Nucleocapsídeo do SARS- CoV-2, foram realizadas etapas de subclonagem nos vetores de expressão pVAX (para as vacinas de DNA; estratégia 1) e pPGK_Agα (para as estratégias de ancoragem de proteínas na levedura; estratégia 2). A inserção correta do antígeno aos respectivos vetores foi confirmada por meio de PCR e análise de restrição. As sequências codificantes para RBD e Spike foram utilizadas como grupos controle nas estratégias 1 e 2, respectivamente. Para estratégia 1, os plasmídeos foram preparados e ajustados para uma concentração final de 50 μg em 30 μl. Já para a estratégia 2, as células de Pichia pastoris (GS115) foram transformadas e analisadas quanto à expressão da proteína por meio de Western-blot, e a ancoragem verificada por meio de Yeast-ELISA. As leveduras foram preparadas e ajustadas para uma concentração final de 10 YU (unidades de leveduras) em 50 μL. Ambas estratégias foram executadas com aplicação de duas doses com intervalo de 7 dias, por via intramuscular em camundongos BALB/c fêmeas (6-8 semanas). Após 14 dias da segunda dose, os animais foram anestesiados e eutanasiados, seguido da condução das análises imunológicas, hematológicas e histopatológicas. De maneira geral, as análises hematológicas e histopatológicas demonstraram ausência de danos. Os antígenos vacinais, sobretudo Scov2-Sint1, levou a ativação de células TCD4+ e TCD8+. Além disso, a partir dos resultados da estratégia 1 e 2, o regime de vacinação heteróloga pode representar uma importante escolha para ser incorporado ao esquema vacinal, integrando perfis tanto celulares quanto humorais contra o SARS-CoV-2.