Emprego de células THP-1 como modelo in vitro para avaliação de vacinas de DNA

Abstract

Os modelos in vitro desempenham um papel crucial na avaliação preliminar de vacinas, destacando-se as células THP-1 pela sua capacidade de replicar características do sistema imunológico humano. As células THP-1, uma linhagem de promonócitos humanos, são amplamente utilizadas em estudos de imunologia por se diferenciarem em macrófagos funcionais, essenciais para estudar mecanismos de apresentação de antígenos e respostas imunológicas. A biotecnologia tem sido fundamental no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, com vacinas de DNA se destacando por induzirem respostas imunológicas robustas e serem de fácil produção e armazenamento. Contudo, a avaliação eficaz dessas vacinas é desafiadora, necessitando de modelos in vitro que mimetizem com precisão as interações imunológicas humanas. As células THP-1 é um modelo versátil e relevante para essa análise, facilitando a compreensão dos mecanismos de ação das vacinas de DNA e a identificação de marcadores de eficácia imunológica. A oncoproteína E6 do HPV-16 é o antígeno vacinal estudado, considerado um alvo interessante na imunoterapia do câncer cervical devido à sua expressão em lesões pré-malignas e invasivas. O estudo investiga o uso das células THP-1 como modelo in vitro para avaliar vacinas de DNA, focando no antígeno E6multi derivado do HPV-16. Neste sentido, foi feita a análise da viabilidade do antígeno, padronização da diferenciação das células THP-1 em macrófagos funcionais com PMA, verificação da eficácia da transfecção desses macrófagos com o DNA plasmidial E6multi, e investigação do perfil de polarização dos macrófagos resultantes. Os plasmídeos vacinais foram construídos a partir do gene de interesse, confirmados por PCR e sequenciamento. Células HEK-293T foram usadas para testar a expressão do antígeno vacinal, enquanto THP-1 foram diferenciadas com sucesso em macrófagos polarizados e transfectadas para análise de expressão gênica por RT-qPCR. A expressão gênica analisada por RT-qPCR mostrou amplificação específica do E6multi. A eficiência de transfecção das células diferenciadas com pVAX1-E6multi foi confirmada, destacando a expressão de marcadores de superfície CD68, CD80 e CD86, característicos de macrófagos ativados (M1). Não houve expressão significativa de CD206 (M2). A otimização das condições de diferenciação com PMA (150 nM por 24 horas) e densidade celular (2x106 células/poço) foi crucial para maximizar a diferenciação celular. Este estudo demonstra a viabilidade da abordagem de vacina multiepítopo e a eficácia da transfecção em células THP-1 diferenciadas para investigações futuras sobre imunoterapia contra HPV.