Purificação, caracterização e atividade biológica de uma lectina extraída de sementes de Adenanthera pavonina l.

Abstract

As lectinas são proteínas capazes de se ligar reversível e especificamente a carboidratos através de um domínio reconhecedor de carboidratos (DRC). Essas proteínas estão presentes desde organismos mais simples até os mais complexos e, em decorrência dos DRC’s, elas possuem diversas atividades biológicas, incluindo antibacteriana, antifúngica, anti-inflamatória, inseticida e cicatrizante de feridas cutâneas. O isolamento de lectina a partir de sementes de Adenanthera pavonina pode identificar princípio ativo com potencial uso biotecnológico desde que essa espécie é popularmente conhecida na Ásia por seus princípios medicinais. O objetivo da presente dissertação foi investigar o extrato salino das sementes quanto a presença de proteína e metabólitos secundários, toxicidade aguda e atividade antimicrobiana e extrair, purificar, caracterizar estruturalmente e determinar a atividade antimicrobiana da lectina de semente de A. pavonina (ApSeL). O extrato salino foi obtido a partir da farinha fina do endosperma das sementes (1g:10mL), após homogeneização da mistura, centrifugação e coleta do sobrenadante (extrato). Flavonoides e derivados cinâmicos, alcaloides, saponinas, carboidratos, terpenos e esteroides foram identificados no extrato salino através de técnicas cromatografia de camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). No teste de toxicidade aguda, não foi observada mortalidade nem alterações bioquímicas ou hematológicas nos grupos tratados com o extrato (2000 e 5000 mg/kg) em relação ao controle. A presença de atividade hemaglutinante (AH) no extrato indicou a presença de lectinas. A AH do extrato foi inibida por N-acetilglicosamina, o que levou ao uso da cromatografia com matriz de quitina para isolamento da lectina. ApSeL foi isolada a partir da eluição com ácido acético 1,0 M. ApSeL é uma lectina termoestável, que necessita da presença de Ca2+ para hemaglutinação e tem sua AH presente na faixa de pH 3-10. Eletroforese para proteínas nativas básicas revelou uma única banda polipeptídica e a natureza catiônica de ApSeL foi confirmada por focalização isoelétrica, que demonstrou um ponto isoelétrico (pI) de 8,7. Eletroforese em condições desnaturantes indicou uma massa molecular de 28 kDa. Esta lectina também apresentou atividade proteolítica, indicando a presença de um sítio catalítico na sua estrutura. Tanto a lectina quanto o extrato salino não foram capazes de inibir cepas bacterianas, mas exibiram atividade fungistática para espécies do gênero Candida. Em conclusão, extrato salino das sementes de A. pavonina apresentou uma diversidade de compostos e baixa toxicidade e é uma fonte de lectina com atividade fungistática.