Marcação de antígenos eritrocitários do sistema ABO com nanopartículas fluorescente de semicondutores

Abstract

Os Quantum dots (QDs) ou ponto quânticos vem sendo cada vez mais aplicados na área de diagnóstico por fluorescência como uma alternativa mais estável em comparação com os corantes orgânicos usualmente aplicados. Em comparação a estes, os QDs têm características ópticas peculiares que os dão vantagens como: resistência ao fotoescurecimento, possuírem um estreito espectro de emissão e uma larga banda de absorção. Uma vez recobertos, estas nanoestruturas podem ser bioconjugadas a alvos biológicos ou mesmo a anticorpos tornando-se fluoroimunoensaios com grande especificidade. Este foi o objetivo deste manuscrito, onde CdS/Cd(OH)2 - emissão no verde - tendo como agente estabilizante o polifosfato de sódio ([(NaPO3)]n) e CdTe sintetizados com telúrio metálico, Cd(ClO4)2, ácido mercaptosuccínico (AMS) - emissão no laranja - e ácido mercaptopropiônico (AMP) - emissão no verde - como agentes estabilizantes, foram bioconjugados por formação de bases de Shiff e por adsorção a anticorpos do sistema sanguíneo ABO e, posteriormente, usados na marcação simples (A e B) e dupla (AB) de eritrócitos previamente fenotipados sendo o tipo O foi usado como controle negativo. Os QDs foram caracterizados opticamente através de espectroscopias de absorção e emissão e estruturalmente através de técnicas de microscopias eletrônica de transmissão, pela qual pode ser confirmada a sua cristalinidade, e também a difração de raio-X, revelando diâmetros médios de ~3 nm para o QD-AMS, ~2 nm para o QD-AMP e ~7,5 nm para o CdS/Cd(OH)2. Através da Citometria de Fluxo, os sistemas QDs-anitocorpos demonstraram especificidade obtendo-se valores de 28,4% para os bioconjugados com CdS/Cd(OH)2-anti-A, 70,64% para o tipo A com o sistema CdTe/CdS-anti-A em FL2 (canal laranja), 37,73% para o tipo B com o sistema CdTe/CdS-anti-B em FL1 (canal verde) e 58,24% de dupla marcação detectada em ambos os canais. Os resultados dos QDs CdS/Cd(OH)2, QD-AMS e QD-AMP bioconjugados a anticorpos do sistema ABO mostram especificidade da técnica e abrem a possibilidade de determinação de fenótipos fracos desse sistema. Além disso, serve de modelo para a bioconjugação com outros anticorpos e consequentemente, para o diagnóstico de várias doenças.