Pontos quânticos como sondas fluorescentes no estudo da carcinogênese em Células Gliais

Abstract

Glioblastoma (grau IV) é o tumor mais agressivo e infiltrante do sistema nervoso central (SNC), que mostra uma série de mutações, bem como alto grau de vascularidade, polimorfismo e atipia celular nuclear. Infelizmente, diagnóstico precoce de tumores cerebrais é difícil, uma vez que ferramentas de imagem não são eficientes para o diagnóstico correto desses tipos de tumores, levando a falhas no tratamento. Aqui nós descrevemos a síntese, caracterização e conjugação de pontos quânticos ou quantum dots (QDs) de telureto de cádmio (CdTe) recobertos com tiol e com o anticorpo contra a proteína ácida fibrilar glial (anti-GFAP), bem como, a preparação de lipossomas. O método de congelamento e descongelamento foi utilizado para encapsular os QDs em diferentes tipos de lipossomas e liberá-los em células tronco. Os lipossomas vazios e contendo CdTe QDs foram caracterizados por microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, tamanho e potencial zeta. Os QDs CdTe-anti-GFAP foram utilizados para um novo direcionamento in vivo e método de imagem para detecção do tipo de tumor glioblastoma U87 xenotransplantado em cérebro de camundongos suíços machos. CdTe QDs não conjugados e CdTe QDs conjugados foram utilizados para marcar U87 linha de células de tumor in vitro e astrócitos saudáveis. A citotoxicidade dos CdTe QDs com fluorescência no verde (530 nm) e no vermelho (644 nm), foi avaliada utilizando MTT nas células U87. O crescimento do tumor foi visualizado no interior do cérebro pela marcação com hematoxilina e eosina e mostrou a entrega com sucesso nas células U87 no parênquima cerebral. CdTe QDs conjugados com anti - GFAP foram injectados na região do tumor e a sua marcação na linhagem celular U87 foi visualizada por microscopia de fluorescência, mostrando dupla marcação com especificidade para vimentina em glioblastomas imunorreactivos. Em comparação com as células tumorais U87, que facilmente foram marcadas com o CdTe QDs conjugados com anti- GFAP, observouse que os astrócitos saudáveis mantidos em culturas primárias tiveram uma maior resistência à sua marcação e foram fracamente marcados. Os resultados descritos aqui direcionam para novas perspectivas na utilização de CdTe QDs na detecção de gliobastoma , sugerindo uma potencial aplicação em cirurgia guiada por imagem.