Seleção de Streptomyces spp produtores de inibidores de β-lactamases/RN

Abstract

Com a utilização clínica de agentes antimicrobianos começaram a surgir bactérias resistentes a diversos antibióticos, entre os quais, se destacam os β- lactâmicos. A hidrólise do anel β-lactâmico pelas enzimas β-lactamases é o mecanismo de resistência bacteriana mais bem documentado. A obtenção de Streptomyces produtores de inibidores de tais enzimas constitui uma importante estratégia para contornar o problema da resistência bacteriana, garantindo a continuidade da terapia antimicrobiana com os β-lactâmicos. Com este objetivo, 19 linhagens de Streptomyces spp, pertencentes a Coleção de Microrganismos do Departamento de Antibióticos da UFPE (DAUFPE), isoladas de solos e preservadas em óleo mineral foram testadas quanto a capacidade de inibir a ação de β-lactamases produzidas por Klebsiella aerogenes ATCC 15380. As 19 linhagens foram purificadas utilizando-se os meios ISP-1 e TSB e submetidas à seleção primária pelos métodos de difusão em ágar, utilizando bloco de gelose e cultivo em meio sólido nos meios CAA e ISP-2. No meio CAA, 15% das linhagens formaram halo de inibição, com 10 a 12 mm de diâmetro e 10% formaram halos maiores que 20 mm de diâmetro. No meio ISP- 2, 5% das linhagens formaram halo de 12 mm de diâmetro e 11% halos de 17 mm de diâmetro. A partir destes ensaios, cinco linhagens (DAUFPE 3036, DAUFPE 3060, DAUFPE 3094 DAUFPE 3098 e DAUFPE 3133) que formaram os maiores halos de inibição, foram selecionadas para ensaio em meio líquido usando meios de cultura sintéticos ou quimicamente definidos e complexos. As fermentações foram realizadas a 300C e 200rpm durante 96 horas. As amostras retiradas em intervalo de tempo pré-definido foram submetidas à centrifugação a 11000 rpm por 5 minutos, para a separação do líquido metabólico, o qual foi submetido a determinação de pH, atividade antimicrobiana e ácido clavulânico, sendo este um potente inibidor de β- lactamases. Observou-se que o melhor meio para produção de inibidor de β- lactamase foi o MPE modificado, em que todas as linhagens apresentaram atividade antimicrobiana contra Klebsiella aerogenes ATCC 15380. Com relação à produção de ácido clavulânico, três linhagens (DAUFPE 3036, DAUFPE 3060 e DAUFPE 3094) apresentaram resultado positivo em dois meios de cultura (MPE modificado e meio com glicerol), enquanto que as duas linhagens restantes (DAUFPE 3098 e DAUFPE 3133) produziram outros inibidores