Produção, purificação e caracterização de enzimas fibrinolíticas obtidas a partir de micro-organismos fotossintetizantes

Abstract

As doenças cardiovasculares são as principais causas de morte no mundo e podem ser causadas pela formação desordenada de fibrina nos vasos sanguíneos. Enzimas fibrinolíticas podem ser usadas para reestabelecer o fluxo sanguíneo normal. O objetivo deste trabalho foi produzir, purificar e caracterizar uma enzima fibrinolítica obtida a partir da microalga Chlorella vulgaris cultivada mixotroficamente usando milhocina, um subproduto agroindustrial do processamento do milho. O cultivo da microalga C. vulgaris utilizando 1% de milhocina obteve um Xm = 1637,45 mg L⁻¹, Pₓ = 181,93 mg L⁻¹ dia⁻¹ e atividade fibrinolítica (FU = 273,82 U mg⁻¹), bem como um menor valor de atividade proteásica total (PA = 33,22 U mg⁻¹). Ambas as enzimas foram purificadas por cromatografia de troca iônica. A enzima purificada de C. vulgaris apresentou uma atividade fibrinolítica de 1834,6 U mg⁻¹ (226,86 mm²) e peso molecular de 45 kDa, confirmado por SDS-PAGE e zimografia de fibrina. A enzima foi Fe⁺²-dependente e inibida pelo inibidor de metaloproteinase, EDTA (43,37%) e serino protease, PMSF (49,59%), caracterizando uma metal-dependente serino protease. Também apresentou taxa de hemólise menor que 4% e atividade trombolítica de 25,6% em apenas 90 minutos de reação. Assim, sugere-se que o cultivo mixotrófico de C. vulgaris utilizando milhocina é uma fonte promissora para produção de enzima fibrinolítica, diminuindo os custos industriais, agregando valor ao produto final e mostrando ser de interesse para as indústrias biomédica e farmacêutica.