Padronização e avaliação da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para detecção de Circovírus suíno 2 no fluido oral de suínos

Abstract

O Circovírus suíno 2 (PCV2) é um agente que possui um papel importante nas perdas econômicas em granjas de suínos através da morte e queda no desempenho desses animais. A literatura cita o desenvolvimento e aplicação com êxito da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para diagnóstico de patógenos humanos e animais, sendo a padronização desta técnica para a identificação da presença do PCV2, de grande importância para suinocultura da região. Desta forma, este trabalho teve como objetivo padronizar e avaliar a STNPCR para detectar o Circovírus Suíno 2 a partir de amostras de fluido oral de suínos. Para isto, foram coletadas 55 amostras de fluido oral de suínos clinicamente saudáveis. O DNA foi extraído e quantificado para realização da PCR convencional e STNCR. Para garantir a segurança e confiabilidade dos resultados, uma PCR direcionada para o gene da β-actina suína foi realizada em todas as amostras. Foram avaliadas diferentes temperaturas, concentrações de primers e número de ciclos. Todos os fragmentos amplificados foram analisados através de eletroforese. Através dos testes para otimização das técnicas, foi possível detectar o produto esperado em ambas as reações, sendo um fragmento de 478pb na PCR direcionada ao gene da β-actina, e um fragmento de 225pb na STNPCR para detecção do PCV2. A padronização da técnica de STNPCR é uma ferramenta útil para a identificação da presença do PCV2, que pode contribuir na redução do impacto econômico que este problema representa para a suinocultura industrial.