Seleção, precipitação e particionamento de proteases com atividades colagenolíticas extraídas dos resíduos do pescado

Abstract

A recuperação de biomoléculas a partir dos subprodutos do pescado tem sido considerada uma prática cada vez mais incentivada, muito devido à fonte abundante de proteases de importância biotecnológica. Dentre os subprodutos, as vísceras internas, principalmente as intestinais, são altamente desejadas. Deste modo, este trabalho objetivou recuperar atividades colagenolíticas de subprodutos do pescado usando técnicas de precipitação e de particionamento. Para tanto, foram pré-selecionadas: robalo-flecha Centropomus undecimalis (102,41 ± 0,00 U/mg), anchova (Pomatomus saltatrix (82,24 ± 0,00 U/mg), xixarro amarelo Caranx bartholomaei (26,66 ± 0,00 u/mL), pampo Trachinotus carolinus (89,00 ± 0,07 U/mg), tambaqui Colossoma macropomum (78,23 ± 0,00 U/mg) e tilápia-do-Nilo Oreochromis niloticus (81,96 ± 0,01 U/mg). Os resíduos com maior atividade colagenolítica foram selecionados (C. undecimalis) e utilizados para pré-purificação. O extrato enzimático de C. undecimalis foi selecionado, apresentando atividade proteolítica de 173,7 U/ml, sendo em seguida purificado parcialmente através de técnicas de precipitação em solventes em diferentes frações, obtendo-se melhores condições (atividade colagenolítica específica, rendimento (y) e fator de purificação (FP)) nas proporções de acetona 90% (246,92 U/mg; y: 24,14%; FP: 2,41), de etanol 60% (116,96 U/mg; y: 8,64%; FP: 1,14) e de sulfato de amônia (NH₄)₂SO₄ fração 60-90% (54,54 U/mg; y: 11,18%; FP: 0,53). Em seguida, o material enzimático foi particionado empregando-se um sistema bifásico, planejamento fatorial de 2⁴, na qual foram analisados as variáveis: concentração de massa molar do polietileno glicol (Mᴍᴘᴇɢ/g/mol) de (400, 3350 e 8000), concentrações de citrato (Cᴄᴛɪ/%w/w), concentração do polietileno glicol (Cᴘᴇɢ/%w/w) e pH (6, 7 e 8). O ensaio 2, formado pela Mᴍᴘᴇɢ 8000, Cᴘᴇɢ 20, Cᴄᴛɪ 15 e pH 6 apresentou maior fator de purificação (3,91), coeficiente de partição (0,63) e rendimento (326,52%). Assim, observou-se que as técnicas de precipitação utilizando solventes orgânicos e de particionamento usando sistema bifásico (PEG/citrato) são altamente recomendadas para a recuperação e purificação parcial de proteases colagenolíticas extraídas de resíduos do pescado processado com potencial uso biotecnológico.