Investigação do mecanismo de ação hipotensor de um peptídeo natriutérico (NPCdc) em ratos com insuficiência renal crônica

Abstract

O NPCdc é um peptídeo natriurético sintético originalmente derivado de outro peptídeo, o NP2_Casca, isolado do veneno da Crotalus durissus cascavella. Neste trabalho propomos investigar o mecanismo de ação hipotensor do NPCdc em ratos com massa renal reduzida, um modelo de insuficiência renal crônica. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da UFPE (nº 23076.016262/2015-01). Ratos Wistar machos, pesando em média 300g foram utilizados. Os animais foram submetidos à cirurgia fictícia (sham) ou a nefrectomia 5/6 (Nx5/6). No 15º dia após a cirurgia, os animais foram anestesiados e submetidos à infusão intravenosa do NPCdc (7,5 μg/kg/min) ou veículo (salina), para avaliação de variáveis hemodinâmicas e parâmetros da função renal. No final das mensurações, o rim e a aorta foram coletados. O rim foi utilizado para avaliação da atividade da Na⁺/K⁺-ATPase e Na⁺-ATPase, bem como para avaliação dos níveis de ânion superóxido. A aorta foi utilizada para dosagem de óxido nítrico (NO) e para avaliação da expressão proteica da óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), endotelial (eNOS) e de sua forma induzida (iNOS). Adicionalmente, a expressão das proteínas cinases, ERK1/2, AKT e cGKI também foram avaliadas. A análise estatística foi realizada através de two-way ANOVA e teste “t” não pareado. Durante infusão do NPCdc no grupo Nx5/6, foram observados: diminuição da pressão arterial média e da resistência vascular renal, nenhuma alteração do fluxo sanguíneo e plasmático renal e elevação da filtração glomerular e da fração de filtração. Embora o NPCdc não tenha aumentado o fluxo urinário, a fração de excreção de Na⁺ e K⁺ apresentou-se aumentada. Ademais, no grupo sham, o NPCdc diminuiu a atividade da Na⁺/K⁺-ATPase e aumentou a atividade da Na⁺-ATPase. Em contrapartida, no grupo Nx5/6, o NPCdc não alterou a atividade da Na⁺/K⁺-ATPase, porém aumentou a atividade da Na⁺-ATPase. Em relação ao estresse oxidativo, os níveis basais de ânion superóxido apresentaram-se inalterados, porém a produção de ânion superóxido dependente da NADPH oxidase apresentou-se diminuída pelo NPCdc. Na aorta, o grupo Nx5/6 apresentou: nenhuma alteração nas expressões da AKT e da ERK1/2, expressão aumentada das isoformas fosforiladas de eNOS e iNOS e diminuição da expressão da cGKI. Ainda na aorta do grupo Nx5/6, os níveis de nitrito apresentaram-se diminuídos, dado que indica uma menor biodisponibilidade do NO. Nas aortas de ambos os grupos tratados com o NPCdc, sham e Nx5/6, os níveis de ERK1/2 fosforilada apresentaram-se aumentados, assim como a expressão da cGKI e a concentração de nitrito. A repercussão do efeito do NPCdc sobre a expressão de ERK1/2 fosforilada ainda precisa investigações adicionais. Estes dados indicam que o NPCdc tem ação hipotensora porque aumenta a filtração glomerular e a fração de excreção de sódio, adicionalmente, aumenta a expressão de cGKI, diminui níveis de ânion superóxido e aumenta a biodisponibilidade do óxido nítrico na aorta.