Biossensores eletroquímicos baseados em filmes compósitos de nanomateriais de carbono para diagnostico molecular e sorológico da Hepatite C

Abstract

A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) atinge cerca de 170 milhões de pessoas no mundo, sendo um grave problema de saúde pública. Devido à doença ser, em muitos casos, assintomática levando a cronificação, podendo levar à cirrose e carcinoma hepatocelular, a disponibilidade de testes práticos e rápidos que auxiliem no diagnóstico é desejável. Entre os métodos de diagnóstico, o desenvolvimento de nanocompósitos resultantes de polímeros e materiais de carbono tem auxiliado no preparo de superfícies sensoras, proporcionando um aumento na transferência eletrônica e maior sensibilidade analítica aos biossensores. O diagnóstico do HCV é realizado através de imunoensaios na pesquisa de anticorpos contra HCV (anti-HCV), que se confirmados positivamente, necessitam de testes moleculares para detectar o cDNA-HCV. Nessa tese, foram desenvolvidos três sensores eletroquímicos à base de filmes nanoestruturados de carbono; o primeiro, utilizando oxido de grafeno (GO) e polipirrol (PPy), o segundo, GO e politiofeno (PTh), e o terceiro, nanotubos de carbono (NTC) e poli-L-lisina (PLL) para a detecção de anti-HCV e RNA viral, respectivamente. A primeira plataforma nanoestruturada foi obtida por eletropolimerização usando-se voltametria cíclica, e apresentou uma excelente estabilidade eletroquímica (Coeficiente de Variação (CV)  0,75%). A técnica de voltametria de onda quadrada foi usada para obtenção das respostas analíticas, observando-se detecção de Anti-HCV numa faixa linear de 2 a 10 ng.mL-1(r = 0.995, p< 0.01). Na segunda plataforma, o nanocompósito de GO e PTh, foi sintetizado em uma única etapa utilizando-se a técnica de voltametria cíclica e brometo de cetramonio (CTAB) como solvente. A plataforma demostrou-se estável (CV  0,6), verificada através da técnica de voltametria cíclica, e específica para o diagnóstico do HCV (LOD = 0.07 ng mL - 1 ), verificada pela técnica de onde quadrada. No terceiro, utilizou-se a técnica de dropcasting para deposição de filmes de NTCs sobre a superfície de PLL, obtida por eletropolimerização. Uma sequência conservada de 20 pares de base (pb), de RNA-HCV, foi utilizada como sonda para hibridização do RNA complementar do HCV (cDNA). Foi possível discriminar amostras positivas em soro enriquecido com as fitas complementares.