Efeito sinérgico e atividade antibiofilme do alendronato de sódio em associação com antimicrobianos frente a cepas de Pseudomonas aeruginosa multirresistentes

Abstract

Pseudomonas aeruginosa é um bastonete Gram-negativo não fermentador, considerada uma bactéria oportunista. As infecções causadas por esse micro organismo representam um problema de saúde pública no Brasil e no mundo, sendo responsáveis pelas altas taxas de mortalidade e morbidade relacionadas a infecções hospitalares. Essas bactérias, em sua maioria, são resistentes aos antimicrobianos atuais, devido a formação de biofilme, que impede a penetração dos antimicrobianos, e, a outros mecanismos de resistência, relacionados aos fatores de virulência dessa bactéria, mediados pelo quorum sensing. A Organização Mundial de Saúde designa esta espécie como prioridade para o desenvolvimento de novas terapias. Desta maneira, o presente estudo teve o objetivo de avaliar a atividade antimicrobiana do alendronato de sódio e dos agentes antimicrobianos: amicacina, cefepima, ceftriaxona, ceftazidima, meropenem, levofloxacino e polimixina B, frente a cepas Pseudomonas aeruginosa (n=12) oriundos de isolados clínicos e duas cepas controle Pseudomonas aeruginosa PAO1 e Pseudomonas aeruginosa SPM-1. Inicialmente foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) seguida da Concentração Bactericida Mínima (CBM). A partir do método Checkeboard foi avaliada in vitro a associação desses antimicrobianos com o alendronato de sódio. A interpretação da atividade de interação foi realizada com base na determinação do Índice de Concentração Inibitória Fracionada (Índice CIF). Por fim, foi avaliada a atividade antibiofilme do Alendronato de sódio (AS), isolado, frente as cepas de Pseudomonas aeruginosa (n=12) e sua atividade antibiofilme quando nas seguintes associações: AS/cepepima, AS/ceftazidima e AS/meropenem. Além disso, foi avaliada a atividade do AS por microscopia óptica para visualizar a alteração na morfologia do biofilme. Todas as cepas apresentaram perfil de resistência aos antimicrobianos testados, com exceção da polimixina B. O valor CIM variou de 32 a 1024µg/mL para amicacina, 64 a 1024µg/mL para cefepima, 512 a 1024µg/mL para ceftriaxona, 16 a 1024µg/mL para ceftazidima e levofloxacino, 8 a 1024µg/mL para meropenem, e 2 a 4µg/mL para polimixina B. O valor da CIM do AS foi de 1024µg/mL para todas as cepas avaliadas. O efeito sinérgico foi observado entre todas as associações de antimicrobianos e AS, com os valores do Índice de Concentração Inibitória Fracionada variando de 0,75 a 0,16. A redução da CIM dos antimicrobianos foi igual ou superior a 75% para todas as cepas. A associação do AS com antimicrobianos de diferentes classes atuou sinergicamente, inibindo cepas de P. aeruginosa resistentes a múltiplos fármacos. O estudo das concentrações do índice CIF frente as cepas de P. aeruginosa apresentou efeito de redução do biofilme estatisticamente significativo em relação ao controle (p< 0,0001), com redução de até 85,4% da formação do biofilme. Além disso, foi observada a atividade antibiofilme do AS em até 87,1%. Corroborando com o efeito visualizado por microscopia óptica em relação a inibição da formação do biofilme. O alendronato de sódio parece aumentar a sensibilidade das cepas de P. aeruginosa multirresistentes e diminuir satisfatoriamente a produção do biofilme, revelando ser um tratamento promissor para infecções causadas por estas espécies bacterianas multirresistentes.