Quantificação simultânea de antirretrovirais em dried blood spot e plasma utilizando LC-MS/MS : farmacocinética e monitorização terapêutica de efavirenz em gestantes

Abstract

De acordo com a Organização Mundial da Saúde, em 2020, havia 1,3 milhão de gestantes vivendo com HIV, das quais aproximadamente 85% receberam medicamentos antirretrovirais para prevenir a transmissão vertical. As alterações fisiológicas induzidas pela gestação ocasionam mudanças na farmacocinética materna, sugerindo potencial variabilidade nas concentrações plasmáticas de antirretrovirais durante este período. Portanto, gestantes podem ser expostas a concentrações subterapêuticas desses fármacos, o que pode aumentar o risco de transmissão vertical do HIV. Essas alterações farmacocinéticas e a possibilidade de não adesão sugerem potencial aplicação para monitorização terapêutica. O presente estudo teve como objetivo desenvolver e validar um método por LC-MS/MS sensível para quantificação simultânea de efavirenz, raltegravir, atazanavir e ritonavir em dried blood spot (DBS) e plasma humano para aplicação em estudos de farmacocinética e motorização terapêutica. Os analitos foram extraídos do DBS com uma mistura de metanol: sulfato de zinco 200 mM 50:50 v/v/ e 100% de metanol para amostras de plasma, seguido de separação cromatográfica em uma coluna Shim-pack® C18, 4,6 mm×150 mm, 5 μm. A detecção foi realizada em um espectrômetro de massas 3200-QTRAP®® com ionização por eletronebulização e detecção através da monitorização de reações múltiplas, com tempo de corrida de 6 min. O método mostrou-se seletivo frente aos interferentes do sangue seco e do plasma, linear na faixa de 15 - 1.000 ng/mL para raltegravir, 50 - 10.000 ng/mL para atazanavir e ritonavir, 50 - 5.000 ng/mL para efavirenz. A precisão e a exatidão foram inferiores a 15% para todos os analitos nos níveis de concentração avaliados. Raltegravir, atazanavir e ritonavir foram estáveis até sete dias a 23 °C e 40 °C, enquanto o efavirenz foi estável até vinte e quatro horas nas mesmas temperaturas. O método foi aplicado com sucesso em amostras de sangue seco em papel e de plasma obtidas de sete gestantes infectadas pelo HIV-1 em tratamento com associação de três antirretrovirais – tenofovir (300mg), lamivudina (300mg) e efavirenz (600mg). A avaliação da correlação entre as concentrações obtidas nas amostras coletadas em DBS e em plasma mostrou-se linear de acordo com as análises de Passing-Bablok e de Bland- Altman. Os valores de concentração determinados nas amostras para fins de monitorização terapêutica do efavirenz mostraram-se fora do intervalo terapêutico em todas as participantes.