Desenvolvimento de teste rápido para leishmaniose visceral canina utilizando imunossensor nanoestruturado baseado em antígenos recombinantes

Abstract

A leishmaniose é um importante problema de saúde pública em pelo menos 88 países, representando uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil para seres humanos e cães. Os imunossensores são dispositivos bioanalíticos que convertem em sinal elétrico a resposta da interação antígeno-anticorpo. Comparados às técnicas imunossorológicas convencionais, os dispositivos têm como vantagem a praticidade, a possível portabilidade, o menor custo e tempo de análise. Neste projeto, foram empregadas as técnicas de voltametria cíclica e de onda quadrada para detectar a resposta da reação antígeno- anticorpo. Utilizou-se a tecnologia de eletrodos impressos (screen-printed electrodes), a qual apresenta facilidade de produção em larga escala, miniaturização e baixo custo. Visando uma maior estabilidade da matriz de imobilização do imunossensor, foram utilizadas monocamadas auto-organizadas (SAM) de alcanotiois, às quais foram ancorados nanotubos de carbono (NTCs), conferindo ao sensor um incremento na sensibilidade e consequente imobilização de biomoléculas. Utilizou-se os antígenos recombinantes rLci2B-NH6, os quais demonstraram alta especificidade quando testados em ensaios sorológicos para leishmaniose visceral (patente PI0900961-2A2BR). A matriz sensora composta pela cisteamina e NTC mostrou-se estável quando submetida a diferentes velocidades de varredura (30 a 180 mV s- 1), ocorrendo transferência de carga reversivelmente em presença de sonda redox. Além disso, quando a matriz sensora foi submetida a 20 ciclos de voltametria cíclica (na janela de potencial de -0,8 a 0,8 V e sob velocidade de varredura de 30 a 180 mV s-1), esta apresentou boa reprodutibilidade com um coeficiente de variação de 3,02%, correspondente à amplitude dos picos redox. Os resultados analíticos frente ao soro canino positivo para Leishmania infantum mostrou variação de amplitude de corrente anódica quatro vezes superior ao soro controle (soro negativo), respostas geradas pela técnica de voltametria de onda quadrada. O desenvolvimento deste imunossensor promove avanços significativos na identificação precisa do parasita nos cães, aumentando as chances de diagnóstico precoce, o que possibilita o controle da doença através da ruptura da cadeia de transmissão.