Desenvolvimento de sistema de carreamento baseado em partículas de β-Glucanos de Pichia Pastoris GS115 para vacinas de DNA utilizando antígenos do Trypanosoma Cruzi

Abstract

A Doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, provoca cardiomiopatias e outros distúrbios graves. As terapias atuais envolvem efeitos colaterais e eficácia limitada em estágios crônicos. Assim, imunoterapias, como vacinas de DNA, são alternativas promissoras devido a suas vantagens em segurança, custo e especificidade. No entanto, enfrentam desafios na apresentação de antígenos e ativação do sistema imunológico. Uma estratégia para superar esses desafios é o uso de veículos de entrega, como partículas derivadas da parede celular de levedura, que são eficazes na entrega intracelular de DNA e expressão gênica. Desse modo, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver uma plataforma de delivery para vacinas de DNA, baseada na utilização de cápsulas derivadas da parede celular de leveduras (YS, yeast shells) Pichia pastoris GS115. As YS foram preparadas por componentes ácidos e alcalinos. Dois vetores de expressão com os genes TcG2 e TcG4 clonados no vetor pVAX1 foram inseridos nas YS usando polietilenoimina (PEI) 2% e Cloreto de sódio (NaCl) 5%. A formação das partículas foi monitorada por microscopia e a eficiência de encapsulação (EE) avaliada com diferentes concentrações de DNA (50, 250 e 500 ng), além da estabilidade em diversas temperaturas (8°C, 25°C e 65°C). Os protocolos utilizando PEI 2% e NaCl 5% obtiveram eficiência de encapsulamento (EE) >80% e >63, respectivamente, no entanto o protocolo com NaCl 5% apresentou melhor retenção do DNA, sugerindo-o como melhor metodologia aplicada. Esses resultados demonstram as YS derivadas de P. pastoris GS115 como uma plataforma eficiente para incorporação de DNA, mas requer novas avaliações in vitro e in vivo para confirmar seu potencial como sistema de entrega.