Purificação e caracterização parcial de duas toxinas hemorrágicas da peçonha de Jararaca malha-de-cascavel, Bothrops eryhromelas (Serpentes, Viperidae)

Abstract

A espécie Bothrops erythromelas, conhecida em Pernambuco como jararaca malha-de-cascavel, está amplamente distribuída na Região Nordeste do Brasil. A hemorragia é um dos sintomas mais característicos do envenenamento botrópico, especialmente em Pernambuco. A ação hemorrágica ocorre devido a um grupo de metaloproteínas zinco-dependentes, denominadas hemorraginas, que agem diretamente na parede dos vasos sanguíneos, sendo divididas em 4 classes de acordo com a massa molecular. O objetivo deste trabalho foi purificar e caracterizar duas hemorraginas de alta massa molecular da peçonha de Bothrops erythromelas (pBe). Para tanto, 865 mg de pBe foram aplicados em coluna de gel filtração Sephacryl S-200 equilibrada com tampão acetato de amônio 50mM contendo 0,3 M de NaCl, pH 5,0, sendo as frações analisadas quanto a intensidade de atividade hemorrágica em camundongos. A fração com maior atividade foi aplicada em coluna Mono Q 5/50 equilibrada com tampão Tris-HCl 100mM, pH 8,0 e eluída em gradiente não linear de NaCl 2M. Os tubos 9 e 18 provenientes da troca iônica foram recromatografados, separadamente, em coluna de gel filtração TSK G-2000 SW equilibrada com tampão acetato de amônio 150 mM, pH 5,0. As toxinas purificadas tiveram sua massa molecular estimada em 55 KDa segundo EGPA-SDS em condições redutoras e foram completamente inibidas por EDTA. Em conclusão, duas novas metaloproteinases hemorrágicas da classe P-III, denominadas berythrogina 1 e berythrogina 2, foram purificadas da peçonha de Bothrops erythromelas