Metabólitos secundários de Ocotea glomerata (Nees) e avaliação da atividade antifúngica de extratos sobre espécies do gênero Candida

Abstract

Candidiase é uma infecção causada por espécies do gênero Candida que pode variar desde manifestações frequentes, como colonização na mucosa vaginal e oral, até o desenvolvimento de maneira sistêmica por via hematogênica ou linfática. Seu agente etiológico mais frequente é C. albicans. O uso indiscriminado e generalizado de drogas antifúngicas levou a um rápido desenvolvimento de cepas resistentes aos medicamentos empregados na terapêutica clínica. Os produtos naturais vêm ganhando destaque nos últimos anos por fornecer uma nova abordagem medicamentosa para o tratamento de processos patológicos, dentre esses, os infecciosos. Frente ao atual cenário, este trabalho teve o objetivo de avaliar o potencial antifúngico dos extratos e frações de Ocotea glomerata frente espécies de Candida spp. através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), tempo de morte e o efeito sinérgico. Os possíveis mecanismos de ação foram investigados através dos testes de ergosterol, sorbitol, viabilidade celular, geração de espécies reativas de oxigênio (EROS) e externalização de fosfatidilserina. As principais classes de metabólitos secundários foram determinadas pelas técnicas de Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O óleo essencial foi extraído através da técnica de arraste a vapor, quantificado e identificado por Cromatografia Gasosa acoplada com Espectometria de Massa (GC- MS). Foi observada atividade antifúngica de todos os extratos testados, no entanto o extrato metanólico apresentou melhor atividade com CIM de 3,12 μg/mL para C. krusei. A combinação do extrato metanólico com cetoconazol e do extrato metanólico com fluconazol apresentaram efeito sinérgico para C. krusei (IFC 0.26) e C. albicans (IFC 0.02), respectivamente. As frações 1 e 5 obtidas do extrato metanólico apresentaram atividade fungicida principalmente para a cepa de C. krusei. O extrato metanólico não apresentou mecanismo de complexação com o ergosterol e sorbitol, porém aumentou os níveis intracelulares de EROS, diminuiu a viabilidade celular de forma dose-dependente e consequentemente, conduziu morte celular por apoptose. A extração e identificação do óleo essencial de O. glomerata resultou na identificação de 23 compostos com predominância de sesquiterpenos (92,28%), destacando o Germacrene-D (21,32%) como o componente majoritário do óleo essencial. O extrato metanólico e suas frações apresentam maior atividade antifúngica frente a diversas cepas de Candida spp. e modulam positivamente a ação dos antifúngicos em combinação com efeitos sinérgicos.