Identificação de parceiros proteicos e mRNAs alvos associados ao papel das proteínas de ligação ao poli-A no processo de tradução em Leishmania infantum

Abstract

Os tripanosomatídeos são protozoários responsáveis por doenças negligenciadas e que se caracterizam pela sua expressão gênica regulada por eventos pós-transcricionais. Boa parte destes eventos contam com a atuação das PABPs, proteínas que se ligam a cauda poli-A dos mRNAs e participam no processo de tradução. Em Leishmania, três homólogos de PABP foram identificados, com a PABP1 já implicada na tradução e as PABPs 2 e 3 com função menos definida. Este trabalho buscou identificar mRNAs associados às três proteínas bem como avaliar propriedades específicas das PABPs 2 e 3 visando melhor definir sua função. Para isso todas foram expressas em Leishmania infantum fusionadas ao epítopo HA e usadas em ensaios de imunoprecipitação. Os mRNAs co-precipitados foram identificados por sequenciamento, onde se observou a PABP1 se associando majoritariamente a mRNAs codificantes de proteínas ribossomais. Já as PABPs 2 e 3 co-precipitaram mais com transcritos codificantes de enzimas e de proteínas com atividade de transporte e ligação, incluindo as histonas. A análise de proteínas coprecipitadas com as PABPs 2 e 3 identificou as ZC3H41 e DRBD2, ligantes de RNAs, e as XPO1 e NTF2, atuantes no transporte de mRNAs, além de fatores de tradução. Mutantes da PABP2 foram testados quanto à sua atuação, destacando a importância do motivo TGM para sua função. As informações geradas irão contribuir na elucidação do modo de ação das PABPs de Leishmania, identificando alvos para estratégias terapêuticas.