Construção de Pichia pastoris recombinante expressando o domínio III da proteína do envelope do vírus Zika

Abstract

O vírus da Zika (ZIKV) é considerado um dos vírus emergentes mais importantes do mundo, podendo apresentar complicações em humanos associadas a quadros de malformações congênitas e anormalidades neurológicas, como a microcefalia e a síndrome de Guillain-Barré, respectivamente. Embora, até o momento, não exista vacina ou qualquer outra medida preventiva consolidada para uso em humanos contra essa infecção, abordagens utilizando a expressão heteróloga do fragmento do domínio III da proteína do envelope viral (EDIII) tem demonstrado seu potencial como antígeno vacinal. O fragmento EDIII é reconhecido como efetivo na indução da produção de anticorpos neutralizantes pelo hospedeiro atuando de maneira protetiva. Neste contexto, uma das principais leveduras utilizadas em estratégias vacinas é a Pichia pastoris, que permite a ancoragem e exposição de proteínas heterólogas em sua superfície. Além disso, P. pastoris possuiatuação como adjuvante natural por apresentar propriedades imunoestimulatórias devido a sua estrutura celular, o que possibilita uma resposta imune potencializada ao antígeno-alvo apresentado. Desse modo, o presente estudo objetivou a elaboração de uma construção vacinal a partir da produção e ancoragem do Domínio III da proteína do Envelope (EDIII) do ZIKV na levedura P. pastoris. O fragmento EDIII foi amplificado por PCR e clonado no vetor de expressão pPICZAα_αAG (vetor modificado; Invitrogen). A inserção correta de EDIII foi confirmada por meio de PCR, análise de restrição e sequenciamento. As células de Pichia pastoris (GS115) foram transformadas com a construção pPICZAαEDIIIαAGde modo integrativo no genoma da levedura. Os transformantes foram analisados quanto a expressão do fragmento EDIII por meio de SDS-PAGE, Western-blot e Dot-blot. A proteína recombinante foi detectada em células de levedura, demonstrando a transcrição do fragmento e consequente produção da proteína. Esse estudo fornece um caminho para uma estratégia vacinal por meio da abordagem de “Yeast Surface Display” contra o vírus Zika e apresenta um modelo experimental para estudos similares com a possibilidade de futuras aplicações profiláticas em humanos.