Controle central do comportamento alimentar em ratos : efeitos do desmame precoce e da suplementação oral aguda de miR-320-3p e miR-375-3p durante o período pós-natal

Abstract

O desmame precoce é um tipo de estresse precoce que está associado com alterações do comportamento alimentar. Apesar disso, pouco se sabe a respeito dos mecanismos moleculares e epigenéticos dentro desse contexto. Adicionalmente, a comunidade científica tem lançado esforços para encontrar estratégias de prevenção de problemas do desenvolvimento associados ao estresse precoce. Neste contexto, a utilização terapêutica de microRNAs tem se destacado. Desta forma, este estudo buscou avaliar os efeitos do desmame precoce sobre parâmetros comportamentais, moleculares e epigenéticos do controle do comportamento alimentar, além do possível efeito preventivo da suplementação pós-natal aguda com miR-320-3p e miR-375-3p. Para isto, dois desenhos experimentais foram elaborados. No primeiro, foram utilizados ratos Wistar machos e fêmeas submetidos ao desmame regular (D30) ou precoce (D15). Entre 250 a 300 dias de vida, estes animais tiveram avaliados a sua massa corporal, ingestão alimentar de 24h, por fases do ciclo circadiano, em resposta à privação alimentar e de alimento palatável. Além disso, foram avaliados o peso do fígado, da gordura abdominal, níveis séricos de triglicerídeos, colesterol total, glicose e expressão gênica de SERT, 5HT1B, 5HT2C, DRD1, DRD2, NPY e POMC no hipotálamo e tronco encefálico através de PCR em tempo real. No segundo experimento, ratos Sprague-Dawley knock-in para GFP na região promotora da CCK foram submetidos ao desmame regular (D30) ou precoce (D15), além de terem recebido suplementação oral de miR-320-3p (D30 e D15) ou miR-375-3p (D30) embebidos em DOSP no dia pós-natal 12. Aos 45 dias de vida, animais de ambos os sexos foram eutanasiados e foram coletados o hipotálamo, hipocampo e tronco encefálico, onde foi avaliada através de PCR em tempo real a expressão dos genes SERT, 5HT1B, 5HT2C, DRD1, DRD2, CLOCK, BMAL1, PER1, PER2, GFP e CCK, e dos microRNAs miR-375-3p, miR-320-3p, miR-132-3p, miR-504 e miR-16-5p. O desmame precoce promoveu hiperfagia e aumento de ingestão de alimento palatável em machos, porém hipofagia em fêmeas. A expressão de 5HT1B, 5HT2C, SERT, DRD1 e DRD2 foi aumentada no tronco encefálico dos machos, além de no hipotálamo serem observados elevada expressão de SERT e DRD1 e expressão diminuída de 5HT1B e POMC. Apesar de na maioria dos casos os efeitos da suplementação de miR-320-3p exercer efeitos semelhantes ao desmame precoce, esta preveniu efeitos do desmame precoce sobre o aumento de miR-16-5p no hipotálamo de fêmeas, aumento de DRD1 no tronco encefálico de machos e aumento de CLOCK no hipocampo de fêmeas. A suplementação de miR-375-3p aumentou a expressão de miR-320-3p no hipotálamo; reduziu a expressão de todos os mRNAs avaliados no hipotálamo, exceto DRD1 e CCK; e reduziu a expressão de 5HT1B, 5HT2C, DRD1, CLOCK, BMAL1, PER1 e PER2 e CCK no hipocampo de fêmeas e de CCK no hipocampo de machos. Assim, concluímos que o desmame precoce altera o comportamento alimentar e a expressão de componentes dos sistemas serotonérgico e dopaminérgico em longo prazo. Adicionalmente, a suplementação de miR-320-3p e miR-375-3 apresentou resultados promissores como estratégia de prevenção às modificações promovidas pelo desmame precoce, apesar de também apresentar resultados semelhantes ao desmame precoce.