Plataformas imunossensoras ópticas e eletroquímicas baseadas em pontos quânticos - aplicações para a zika

Abstract

A Zika é uma arbovirose que foi declarada emergência global devido a sua capacidade de disseminação e tendência em deixar sequelas, como a microcefalia em recém-nascidos e a síndrome de Guillain-Barré em adultos. Portanto, a detecção de biomarcadores do Zika vírus (ZIKV) ou anticorpos responsíveis à infecção é relevante, pois ainda não há vacina disponível. A detecção da Zika, no entanto, continua oferecendo desafios e instiga a busca por métodos menos laboriosos e/ou mais sensíveis.Então, o desenvolvimento de metodologias alternativas e complementares se faz

importante, e nesse contexto, os pontos quânticos (PQs) exibem vantajosas propriedades físico- químicas, tanto para plataformas sensoras ópticas como eletroquímicas, tais como alta

fotoestabilidade e superfície ativa para conjugação. Assim, o objetivo desta tese visou o desenvolvimento de plataformas sensoras ópticas e eletroquímicas baseadas em PQs, e sua aplicação na detecção de anticorpos e proteínas virais da Zika. Para a plataforma óptica foram desenvolvidos conjugados de PQs ligados covalentemente a anticorpos anti-IgG que foram aplicados na detecção de anticorpos IgG anti-proteína do envelope do ZIKV (anti-PE ZIKV). Para tanto, o fluoroimunoensaio foi primeiramente otimizado com a detecção de IgG humano. A avaliação da conjugação e as detecções foram realizadas por ensaio em microplaca. Os conjugados foram preparados com sucesso e permaneceram funcionais por pelo menos quatro meses. A aplicação dos conjugados levou a resultados promissores, detectando anticorpos anti-PE ZIKV em uma concentração de 100 a 200× menor que a esperada para a resposta imune. Já para a montagem eletroquímica, inicialmente foi estudado o papel dos PQs nessas plataformas, que foram constituídas por eletrodos convencionais de carbono vítreo (ECV) modificados com polipirrol aminado (PPyam). As moléculas IgG e anti-IgG foram utilizadas como modelos. O estudo revelou que, somente quando os PQs foram imobilizados covalentemente na superfície, houve um aumento da área funcional do eletrodo e uma efetiva detecção. Esse resultado enfatizou a importância do PQ para o desenvolvimento de plataformas eletroquímicas sensíveis. Por fim, foi realizada a transposição dessa plataforma para eletrodos impressos de carbono (EIc)/PPyam e PQs, para imobilização de anticorpos anti-PE ZIKV e detecção de PE-ZIKV. A especificidade da plataforma foi avaliada utilizando-se a PE-DENV III (PE do vírus da dengue). A plataforma foi capaz de detectar a PE de forma sensível e específica (LOQ = 0,4 ng/mL). Portanto, conclui-se que os PQs se apresentam como efetivas nanoferramentas para confeccionar plataformas sensoras ópticas e eletroquímicas para detecção de anticorpos e proteínas virais da Zika, com potencial de aplicação para outras arboviroses.