Filogenia e morfologia de Pseudoperonospora associada à Cucurbitáceas no Brasil

Abstract

Dentre os gêneros de oomicetos causadores de míldios, Pseudoperonospora se destaca devido ao impacto gerado na agricultura mundial. Uma das espécies mais importantes desse gênero é a espécie Pseudoperonospora cubensis, conhecida por causar o míldio das cucurbitáceas, doença relatada em aproximadamente 70 países e que atinge culturas comerciais importantes da família Cucurbitaceae como o pepino (Cucumis sativus), a melancia (Citrullus lanatus), as abóboras (Cucurbita máxima, C. moschata e C. pepo) e o melão (Cucumis melo). Estudos sobre a diversidade e filogenia de Pseudoperonopsora apontam que a epidemia que ocorreu em 2004 nos EUA, e as epidemias em outras partes do mundo como Israel e parte da Europa, podem estar relacionadas ao surgimento de uma nova espécie críptica de Pseudoperonospora. O conhecimento sobre essa nova possível espécie é o ponto de partida para o desenvolvimento de cultivares de cucurbitáceas resistentes e para o manejo eficiente da doença. Portanto, o objetivo deste estudo foi determinar a filogenia de Pseudoperonospora associada ao míldio das cucurbitáceas em áreas de diferentes regiões do Brasil. Para isso, foram realizadas coletas de folhas com sintomas de míldios em áreas de produção de Cucurbitáceas nos estados de Pernambuco, Minas Gerais, Ceará, Goiás e no Distrito Federal. Para as análises filogenéticas foi realizada a extração de DNA, depois as reações de PCR utilizando primers DC-6 e LR-0; Cox2-F e Cox2-RC4; Ypt1F e Ypt4R, para amplificação da região espaçador transcrito interno (ITS), da região mitocondrial citocromo c oxidase subunidade II (cox2) e proteína relacionada a Ras (Ypt1), respectivamente. Os produtos de PCR foram sequenciados e as sequências de nucleotídeos foram analisadas, editadas e alinhadas para realização da análise filogenética de Inferência Bayesiana (BI). Para análises morfológicas as estruturas do patógeno foram montados em lactoglicerol para visualização em microscópio de luz e foram realizadas 30 medições de todos os caracteres morfológicos relevantes. Foram obtidas 36 amostras de DNA de Pseudoperonospora e o sequenciamento resultou em 26 sequencias da região Cox2 e 25 sequencias de ITS (totalizando 51 sequencias). As análises filogenéticas das regiões genicas Cox2 e ITS foram realizadas separadamente e em conjunto, o que gerou uma árvore filogenética de ITS que apresentou um grande grupo monofilético com todos as amostras. Na análise filogenética de sequências de Cox2 assim como na árvore concatenada (Cox2/ITS) as amostras do presente estudo foram separadas em dois grupos. A existência desses dois agrupamentos sugere que no Brasil ocorre diversidade filogenética entre as linhagens de P. cubensis, reforçando a possibilidade de existirem espécies crípticas causadoras do míldio das Cucurbitáceas. Porém as análises não apresentam dados robustos o suficiente para a proposição de uma espécie críptica de P. cubensis. Como consequência da intima relação filogenética existente nesse grupo são necessárias análises de genes adicionais com alto sinal filogenético.