Estudo da purificação e identificação de imunoglobulina anti-dengue utilizando sistemas de separação e técnicas analíticas

Abstract

A purificação de imunoglobulina G (IgG) específica para dengue é essencial para o desenvolvimento de diagnósticos precisos e produção de insumos biotecnológicos. Neste estudo, foi aplicado um Sistema de Duas Fases Aquosas (SDFA) utilizando polietilenoglicol (PEG) 3350 e sal fosfato (pH 7,0), seguido da adição de ácido caprílico e filtração, visando a remoção de proteínas contaminantes. A eficiência da purificação foi avaliada por ELISA, eletroforese em gel SDS-PAGE e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Os resultados demonstraram que a IgG permaneceu majoritariamente retida na fase intermediária (precipitado do PEG), enquanto a fase salina apresentou apenas traços mínimos da proteína. A quantificação por HPLC indicou que a concentração final da IgG na amostra purificada foi de 5,36 mg/mL. A formação do precipitado foi influenciada pelos tempos de agitação, repouso e centrifugação, destacando-se importância do ajuste dessas variáveis no processo. Como aprimoramento, sugere-se a remoção do PEG por diálise ou ultrafiltração para evitar interferências em análises posteriores. O método desenvolvido demonstrou-se eficiente e reprodutível, oferecendo uma alternativa viável para a obtenção de IgG purificada com alta seletividade e rendimento.