Identificação de inibidores de protease e análise de toxicidade de extratos proteicos de palma forrageira (Opuntia stricta)

Abstract

A Caatinga é um bioma exclusivamente brasileiro, rico em plantas adaptadas ao semiárido, como a palma forrageira (Opuntia spp.), usada na alimentação bovina e com potencial na medicina alternativa devido a seus compostos bioativos, especialmente inibidores de protease, com potencial terapêutico. Devido ao aumento do interesse por terapias biológicas, que são menos nocivas ao organismo do que compostos químicos, é essencial realizar testes toxicológicos para assegurar a segurança individual, social e ambiental. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo analisar a toxicidade de extratos proteicos fracionados e enriquecidos com inibidores de protease obtidos dos cladódios de Opuntia stricta. Inicialmente, foram realizadas análises in silico em bancos de dados do gênero Opuntia para se obter informações sobre domínios conservados referentes a inibidores de protease. Em paralelo, foi realizada extração, precipitação e fracionamento do extrato bruto, visando obter inibidores que, posteriormente, passaram por quantificação e SDS-PAGE, para avaliar a integridade proteica dos extratos, tendo por fim o teste de toxicidade em modelo macrófita (lentilha-d’água) com diferentes doses dos extratos fracionados. Depois, foi feita espectrometria de massas LC-MS/MS para identificação dos inibidores de protease e realização de análises bioinformáticas, visando estudar as atividades biológicas realizadas pelos inibidores identificados. Os resultados demonstraram que a integridade proteica foi mantida e que os inibidores de protease foram identificados em diferentes frações, comprovando a eficiência dos métodos utilizados para fracionamento e a integridade do gel de poliacrilamida. A análise do teste de toxicidade demonstrou diferentes graus de inibição do crescimento das lentilhas-d’água (Lemna aequinoctialis) e processos de clorose na planta em diferentes extratos, mas com respostas similares em relação às dosagens. Os resultados apresentados mostraram considerável variedade de inibidores de protease presentes nas frações, com caráter importante para estudos futuros. Já os testes toxicológicos foram eficientes para o entendimento das dosagens menos danosas de proteínas, podendo servir até como referência para outros futuros estudos de toxicidade.