Preparações lectínicas de sementes de moringa oleifera contra Aedes aegypti: efeitos no desenvolvimento e fecundidade, investigação de mecanismo estimulante de oviposição e desenvolvimento de formulação

Abstract

O mosquito Aedes aegypti é vetor dos vírus causadores da dengue, chikungunya, febre amarela e doença pelo vírus Zika. O controle desse vetor é um dos pontos-chaves na profilaxia dessas doenças. WSMoL (lectina solúvel em água de sementes de Moringa oleifera) é uma proteína com ações larvicida, ovicida e estimulante de oviposição sobre A. aegypti. A presente tese teve como objetivos: analisar o efeito de preparações (extrato e fração lectínica) contendo WSMoL no desenvolvimento e fecundidade de A. aegypti; investigar possíveis receptores de WSMoL presentes nas patas de fêmeas e que possam estar envolvidos na ação estimulante de oviposição; e desenvolver formulação (tipo comprimido) inseticida contendo a fração. Para alcançar o primeiro objetivo, indivíduos de A. aegypti foram expostos por 24 h durante o terceiro instar larval ao extrato (0,1–1,0 mg/mL de proteínas) ou fração (0,05-0,6 mg/mL de proteínas) e a sobrevivência e o desenvolvimento foram seguidos por 9 dias após a exposição. A capacidade de alimentação de fêmeas adultas que se desenvolveram a partir das larvas tratadas e a eclosão dos ovos depositados por elas também foram avaliados. Além disso, alterações na histologia do intestino médio de larvas no quarto estágio, pupas e adultos derivados dos indivíduos tratados foi investigada. Na segunda etapa, extrato de proteínas de membrana das patas de A. aegypti obtido utilizando o detergente Triton X-100 foi aplicado em coluna contendo a matriz WSMoL-Sepharose e as proteínas adsorvidas foram eluídas com ácido acético 0,1 M e avaliadas quanto ao perfil em cromatografia de gel filtração e em eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes (SDS-PAGE). A similaridade das proteínas adsorvidas com sequências depositadas em bancos de dados foi investigada. Por fim, comprimidos contendo a fração lectínica foram desenvolvidos e avaliados quanto aos efeitos larvicida, ovicida e moduladora de oviposição. O extrato e a fração induziram a morte de larvas de A. aegypti ao longo do período pós-exposição. Ambas as preparações também atrasaram o ciclo de desenvolvimento. O intestino médio das larvas e pupas tratadas mostrou desorganização e vacuolização epitelial, enquanto nos adultos tratados, o epitélio foi subdesenvolvido em comparação ao controle. As fêmeas adultas que se desenvolveram a partir de larvas tratadas com a fração ganharam menos peso após o repasto sanguíneo e depositaram menor quantidade de ovos, que também apresentaram menor taxa de eclosão. A matriz WSMoL-Sepharose foi capaz de reter proteínas presentes no extrato de patas. O pico proteico continha proteínas com massa molecular de aproximadamente 20 kDa, detectadas duas bandas polipeptídicas (17,0 e 23,7 kDa) em SDS-PAGE. Análise por MS/MS indicou similaridade com transportadores ABC, que são amplamente distribuídos em insetos e

têm sido relacionados com o efluxo de inseticidas. Os comprimidos contendo a fração a 10% e 15% promoveram mortalidade de 42,5% e 95% das larvas após 48 h, respectivamente. Os comprimidos a 5%, 10% e 15% inibiram (36 a 74%) a eclosão dos ovos após 72 h de exposição. Ainda, o comprimido a 15% apresentou efeito repelente de oviposição. A partir da presente tese, pode-se concluir que: a) a exposição de larvas de A. aegypti a extrato aquoso e fração contendo WSMoL resultou no desenvolvimento de fêmeas com epitélio intestinal subdesenvolvido, ingurgitamento reduzido após repasto sanguíneo e consequente comprometimento de sua fertilidade e fecundidade; b) WSMoL é capaz de se ligar a proteína(s) de membrana presentes nas patas de fêmeas, o que pode estar relacionado com a atividade estimulante de oviposição; c) preparação enriquecida de WSMoL apresentou atividade inseticida contra A. aegypti quando incorporada em comprimidos.